Определение группы крови перекрестным методом

В медицинской практике врачам часто приходится определять группу крови. Делают это двумя способами – двойной метод, перекрестная реакция. Благодаря определению данных возможно переливание крови, планирование безопасной беременности, выполнение других медицинских процедур.

Перекрестный метод определения группы крови заключается в выявлении альфа и бета изогемагглютинатов при помощи стандартных эритроцитов. Врач исследует взаимодействие естественных агглютининов на поверхности эритроцитов и антигенов стандартных эритроцитов AB0.

Общая характеристика перекрестного метода

В ходе проведения перекрестного метода выявляют изогемагглютинаты 2 видов:

• A (альфа);
• B (бета).

Определение происходит при помощи стандартных эритроцитов. В ходе проведения реакции врачу требуется выявить взаимодействие естественных агглютининов на поверхности эритроцитов и антигенов стандартных эритроцитов AB0.

Стандартные эритроциты – это взвесь свежих эритроцитов, располагающихся внутри реактива, содержащегося в наборе. Чтобы реакция была точной, реактив требуется хранить по следующим правилам:

• оптимальный температурный режим составляет 4 градуса;
• для получения стандартных эритроцитов используют донорскую биологическую жидкость от 3 человек с одной и той же группой крови;
• реакцию требуется проводить при температуре не более 25 градусов с хорошим освещением.

Благодаря перекрестному методу можно выявить кровь 4 групп:

• 0 – первая группа с отсутствием изогемагглютининов;
• A – вторая с наличием изогемагглютинина альфа;
• B – третья с наличием изогемагглютинина бета;
• AB – четвертая, включающая одновременно оба изогемагглютинина.

После проведения анализа врач заполняет табличку, где указывает наличие или отсутствие реакции агглютинации.

Чтобы понять перекрестную реакцию, требуется разобраться в ее основах.

1. В реакции одновременно используются цоликлоны и стандартные эритроциты, чтобы получить более точные данные.
2. Одновременно используют моноклональные антитела альфа, бета, альфа и бета, а также стандартные эритроциты трех групп.
3. Для анализа берут венозную биологическую жидкость. Ее центрифугируют, получая сыворотку. Именно из нее дальше проводят исследование.
4. Сыворотку разливают по белой пластинке с лунками. Биологическую жидкость вносят в порядке слева направо. Обязательно указывают фамилию, инициалы пациента, чтобы не перепутать данные.

При помощи моноклональных антител формируют реакцию гемагглютинации. Благодаря дополнительному использованию цоликлонов проводят контроль качества. Если с ними тоже произошла агглютинация, врач подтверждает специфическую реакцию.

Ход проведения исследования

Чтобы провести анализ, у пациента берут венозную кровь. В ней сосредоточено оптимальное количество клеточных элементов, в том числе эритроцитов. Далее выполняют действия поэтапно:

• стабилизатор в венозную жидкость не добавляют, но используют антикоагулянт, чтобы жидкость не свернулась;
• биологическую жидкость требуется отстоять в течение 2 часов;
• предварительно кровь центрифугируют на высоких оборотах, чтобы получить сыворотку;
• из полученной порции сыворотки отбирают 5 мл, перенося в пробирку;
• при помощи раствора хлорида натрия 0,9% отмывают стандартные эритроциты;
• берут планшет с лунками, маркируют его соответствующими группами крови;
• в лунки добавляют по 2-3 капли сыворотки, тщательно перемешивают содержимое стеклянной, стерильной палочкой, входящей в комплект реактивов;
• в течение 3-4 минут слегка потряхивают лунки;
• выявляют наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов.

Если все правила исследования соблюдены верно, произойдет агглютинация одного типа, так как у каждого человека может быть лишь одна группа крови.

Расшифровка анализа

После проведения анализа врач-лаборант сверяет полученную реакцию агглютинации с таблицей.

В лунках смотрят на наличие или отсутствие реакции агглютинации, поэтому ставят плюс или минус.

Ниже прописывают расшифровку, соответствующую одному из параметров.

1. Если произошла реакция агглютинации в лунках альфа и бета, это говорит о наличии одновременно двух антигенов, поэтому у пациента обнаруживают первую группу.
2. Склеивание эритроцитов в 3 лунке. Определяют 2 группу крови.
3. Если произошло склеивание эритроцитов в лунке альфа, пациент обладает 3 группой.
4. При отсутствии реакции агглютинации ни в одной лунке, у человека 4 группа.

Если врач-лаборант проводит реакцию перекрестным методом, помимо обнаружения альфа и бета антигенов дополнительно используют цоликлоны. Это моноклональные реагенты для обнаружения типа антигенов на поверхности эритроцитов. Вещество входит в набор реагентов, чтобы сформировать реакцию гемагглютинации.

Показания к исследованию

Многие люди на протяжении всей жизни не представляют, какой группой крови они обладают. Выявление параметра требуется не всегда. Врачи рекомендуют определять его при следующих показаниях:

• потребность переливания, например, при механических повреждениях, обильной потере биологической жидкости во время родов или операции;
• гемолитическая болезнь новорожденных, то есть несовместимость резус-фактора у матери и плода с риском гибели младенца;
• подготовка к хирургическому вмешательству;
• планирование и ведение беременности.

Переливание можно осуществлять только строго совместимых показателей. Иначе произойдет реакция несовместимости. Она приводит к массивному уничтожению эритроцитов, из-за чего внутренние органы пациента перестают функционировать на фоне тяжелой гипоксии (кислородной недостаточности).

Чтобы переливание прошло успешно, обязательно проводят анализ на определение группы крови. В лабораторных условиях часто выполняют перекрестный метод. Благодаря ему выявляют групповую принадлежность, а также наличие или отсутствие резус-фактора. Врачи рекомендуют переливать только соответствующую группу. Но в экстренных условиях можно воспользоваться следующими правилами:

• пациенты с 1 группой относятся к универсальным донорам, то есть их эритроциты подходят любым людям;
• кровь пациентов со 2A подходит для людей с 3 группой;
• кровь пациентов с 3B подходит для людей с 4 группой;
• люди с 4AB являются универсальными донорами, то есть им подходят эритроциты от любой другой групповой принадлежности.

Перечисленные правила относятся к исключениям. Врачи настоятельно рекомендуют переливать только строго соответствующую биологическую жидкость, иначе могут развиться непредвиденные последствия.

Благодаря перекрестному методу можно не только определить групповую принадлежность крови, но и подтвердить качество реакции. Метод очень специфичен, в точности определяет требующийся показатель. Анализ проводят в течение 30-40 минут, поэтому лечащий врач может получить данные за короткие сроки, что в некоторых случаях поможет спасти человеку жизнь.

Автор статьи

Екатерина Беликова

врач лабораторной диагностики

В 2014 г. с отличием окончила Северо-Кавказский федеральный университет по специальностям "Медицинская биохимия" и "Клиническая лабораторная диагностика.

Специально для Mirmam.pro

Источники:

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГРУПП КРОВИ АВО/ А. И. Воробьев: Научный центр РАМН. 1999.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВО ПРИ ПОМОЩИ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК: инструкция по применению / М.П. Потапнев, Э. Л. Свирновская, Е. М. Дворина, Т.В. Будько, Е.В. Полкова. Минск, 2008.